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　　產(chǎn)品快訊：過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒

　　規(guī)格：50T/48S

　　注意：正式測定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

　　產(chǎn)品內(nèi)容：

　　提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存;

　　試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存;

　　試劑二：液體 0.33mL×2 瓶，4℃保存;用時(shí)每瓶加入5mL 試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

　　試劑三：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。

　　產(chǎn)品說明：

　　POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物， 在470nm有特征光吸收。

　　需自備的儀器和用品：

　　可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

　　過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒操作步驟：

　　一、粗酶液提取：

　　1、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：

　　細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè))：提取液體積(mL)為 500~1000：1 的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 提取液)，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

　　組織：按照組織質(zhì)量(g)：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入

　　1mL 提取液)，進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

　　2、 血清(漿)樣品：直接檢測。二、測定步驟：

　　1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。

　　2、測定前將試劑一、二和三 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)放置10min。

　　3、樣本測定表

　　試劑名稱(µL)測定管

　　樣本15

　　蒸餾水270

　　試劑一520

　　試劑二130

　　試劑三135

　　在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計(jì)時(shí)，記錄470nm下30s 時(shí)的吸光值

　　A1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA=A2-A1。

　　注意：

　　a.若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在 37℃(哺乳動(dòng)物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上，測定時(shí)加入15µL 樣本和1055µL 混合液測定。

　　b.如果ΔA 小于0.005，可將反應(yīng)時(shí)間延長到5min。如果ΔA 大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

　　三、POD 活性計(jì)算：

　　1、 血清(漿)POD 活性

　　單位定義：每mL血清(漿)在每mL 反應(yīng)體系中每分鐘A470 變化0.01 為一個(gè)酶活力單位。計(jì)算公式：POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA

　　2、 組織、細(xì)菌或細(xì)胞 POD 活性

　　(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算

　　單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

　　POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

　　(2)按樣本鮮重計(jì)算

　　單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

　　POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

　　(3)按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

　　單位定義：每1萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化0.01為一個(gè)酶活力單位。

　　POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=14.27×ΔA

　　V反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL;V樣：加入樣本體積，0.015mL;V樣總：加入提取液體積，1mL;T：反應(yīng)時(shí)間，1min;Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL;W：樣本鮮重，g;500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。

　　過氧化物酶試劑盒本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命，追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承：遵紀(jì)守法，嚴(yán)于律己，寬仁以待，敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn)，以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場，較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏，是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作，共創(chuàng)美好的未來。